填料?
不同序列的多肽理化性質(zhì)及疏水性有很大的區(qū)別，多數(shù)情況分子量小于4000和親水性多肽用C18柱分離效果最佳，分子
量大于5000和極端疏水性的多肽以C4柱分離效果最佳，而C8柱介于C18和C4柱之間，其應(yīng)用效果與C18柱更相似;對一些
特殊選擇性的多肽，也可選擇苯基柱和聚合物色譜柱。
5. 在純化過程中選擇聚合物填料的原則是什么?
需要使用高于正常pH或溫度條件進行純化時，可以使用pH范圍極寬的聚合物色譜柱，它的優(yōu)點就是在極端pH條件下不
會降解，可以使用強酸和強堿作為流動相進行分離純化。
6. 影響多肽純度檢測結(jié)果的因素
影響多肽純度檢測結(jié)果的因素很多，主要包括：流動相體系、色譜柱型號、柱溫、波長及色譜儀的性能指標，每一項不
同都可能造成結(jié)果產(chǎn)生誤差。
7. 在多肽檢測過程中經(jīng)常出現(xiàn)基線漂移的原因是什么?怎么解決?
固定三氟乙酸濃度的梯度洗脫有時會在210-220nm檢測處造成吸收基線的漂移，這是許多反相分離中基線漂移的原因。降低
或消除由于三氟乙酸光譜吸收變化引起的基線漂移需要盡量使檢測波長靠近215nm，并在溶劑B中比在溶劑A中少加15%的
三氟乙酸補償基線漂移。例如溶劑A中的三氟乙酸為0.1%時，溶劑B中可用0.085%。
8. 反相色譜分離純化后，怎樣去除產(chǎn)品中流動相產(chǎn)品中的TFA，乙腈等雜質(zhì)?
凍干的辦法應(yīng)該可以除去大多數(shù)TFA和乙腈，只要不超過允許范圍，這種辦法是最簡單、有效的。對TFA含量要求更高的
一些藥物肽凍干的方法一般無法完全達到要求，需要進行專門的轉(zhuǎn)鹽或脫鹽。
9. 多肽一般有哪幾種鹽的形式?通過什么方式轉(zhuǎn)鹽或脫鹽?
多數(shù)多肽都是在TFA體系下分離純化的，所以多肽以TFA鹽的形式最多，其次藥物肽一般有醋酸鹽及鹽酸鹽的形式，極少
數(shù)藥物肽會有一些特殊的鹽形式。轉(zhuǎn)鹽方式多為離子交換法和HPLC法，而脫鹽可用透析袋和超濾膜。
10. TFA在緩沖液中是不是只起到調(diào)節(jié)PH的作用?TFA的濃度越高基線漂移越厲害，那是不是說TFA的濃度在緩沖液PH允許
的情況下越低越好?
(1)TFA起到類似離子對的作用，一般濃度在0.05-0.1%，過高的濃度，會使溶液偏酸，長時間使用可能影響柱子壽命。
(2)同時TFA可以抑制硅膠表面硅醇基，改善堿性化合物的峰型。有時0.1%TFA分離不好的話。可以考慮加大濃度到0.2%。但
要注意用完后及時沖洗色譜柱。
(3)走梯度時，因為走成基線漂移，但對制備的影響不大。
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