多對二硫鍵成環(huán)技術
蛋白質和多肽類藥物具有作用位點專一，療效明確等優(yōu)點，近年來，蛋白質和多肽類藥物的研究和發(fā)展已經成為生物醫(yī)藥領域研究的一個熱點。二硫鍵在維持多肽和蛋白質的空間立體結構及由此決定的生物活性中發(fā)揮著重要的作用。二硫鍵即為蛋白質或多肽分子中兩個不同位點Cys的巰基（-SH）被氧化形成的S-S共價鍵。一條肽鏈上不同位置的氨基酸之間形成的二硫鍵，可以將肽鏈折疊成特定的空間結構。
多肽分子通常分子量較大，空間結構復雜，結構中形成二硫鍵時要求兩個半胱氨酸在空間距離上接近。此外，多肽結構中還原態(tài)的巰基化學性質活潑，容易發(fā)生其他的副反應，而且肽鏈上其他側鏈也可能會發(fā)生一系列修飾，因此，肽鏈進行修飾所選取的氧化劑和氧化條件是反應的關鍵因素，反應機理也比較復雜，既可能是自由基反應，也可能是離子反應。
多肽的二硫鍵修飾中，分子內或者分子間一對二硫鍵的合成通常比較容易，反應條件有多種選擇，比如空氣氧化，DMSO氧化等溫和的氧化過程，也可以采用H2O2，I2，汞鹽等激烈的反應條件，反應產物也比較容易純化分離，得到較高的純度和產率。
空氣氧化法形成二硫鍵是多肽合成中最經典的方法，并且在早期的研究中取得了較好的結果。采用空氣氧化法通常是將巰基處于還原態(tài)的多肽溶于水中，在近中性或弱堿性條件下（PH值6.5～10），反應24小時以上。為了降低分子之間二硫鍵形成的可能，該方法通常需要在低濃度條件下進行。
碘氧化法在多肽合成中應用同樣廣泛，一般將多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中，逐滴滴加10～15mol/L的碘進行氧化，反應15～40min。當肽鏈中含有對碘比較敏感的Tyr、Trp、Met和His的殘基時，氧化條件要控制的更精確，氧化完后，立即加入維生素C或硫代硫酸鈉除去過量的碘。
當一條肽鏈上需要形成兩對或兩對以上的二硫鍵時，反應過程就變得相對復雜。在固相合成多肽之前，需要提前設計幾對二硫鍵形成的順序和方法路線，選擇不同的側鏈巰基保護基，利用其性質差異，分步氧化形成兩對或多對二硫鍵。通常采用的巰基保護基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團。我們分別列出兩種以2-Cl樹脂和Rink樹脂為載體合成的多肽上多對二硫鍵形成路線：
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