生物素可以與親和素或者鏈霉親和素有力結(jié)合，結(jié)合強度甚至接近共價鍵。生物素標記的肽通常用于免疫測定，組織細胞化學和基于熒光的流式細胞術(shù)。標記的抗生物素抗體也可以用來結(jié)合生物素化多肽。生物素標記常連接在賴氨酸側(cè)鏈或者N末端。通常在多肽和生物素之間使用6-氨基己酸作為紐帶，紐帶能夠靈活結(jié)合底物，并且在有空間位阻的情況下能結(jié)合地更好。專肽生物根據(jù)需求，向客戶提供具有不同位點生物素標記多肽的定制合成。

專肽生物合成用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究的生物素化肽。盡管生物素可以在 N 端或 C 端引入（通過賴氨酸殘基），但我們建議使用 N 端修飾，因為它成本低、成功率高、周轉(zhuǎn)時間短且易于操作。因為多肽合成是從 C 端到 N 端合成的，因此，N 端修飾是 SPPS步驟的最后一步，不需要額外的特定縮合步驟。相比之下，C 端修飾需要額外的步驟，并且通常更復(fù)雜。當然，原則上生物素可以定位在任何地方。

生物素可以通過多種不同的接頭或間隔物與肽分離。盡管如此，還是建議包含一個靈活的間隔物，例如 Ahx（一個 6 碳接頭），以使生物素標簽更加穩(wěn)定或靈活。

專肽生物在 N 端或 C 端提供生物素化：生物素-N 端、賴氨酸-生物素-肽中間和賴氨酸-生物素-C 端。
專肽生物還可以使用 Ahx 接頭或長碳 (LC) 接頭提供生物素化：生物素-Ahx-N 末端、Lys-Ahx-生物素-肽中間、Lys-Ahx-生物素-C-末端。

（生物素結(jié)構(gòu)）

示例：
GRGDS在N端和C端標記生物素的結(jié)構(gòu)展示。

1、GRGDS在N端標記生物素，不增加Ahx 接頭

2、GRGDS在N端標記生物素，增加一個Ahx 接頭

3、GRGDS在C端標記生物素，不增加Ahx 接頭

4、GRGDS在C端標記生物素，增加一個Ahx 接頭。

磷酸肽的合成
在生命過程中發(fā)揮重要作用，磷酸化的位置在多肽上的Tyr、Ser，Thr，。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸，目前使用的都是單芐基磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法，但是目前采用該方法合成磷酸化多肽也有缺點，特別是在合成多磷酸化多肽或氨基酸較長的多肽的時候，連接效率低，最后產(chǎn)品純度很低，對于這種磷酸化多肽，我們考慮采用后磷酸化方法，其合成過程就是在多肽合成結(jié)束后，選擇性脫去要標記的氨基酸的側(cè)鏈保護基，對于Tyr，Thr可以直接使用側(cè)鏈不保護的氨基酸進行反應(yīng)，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt），在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化，采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體，連接到羥基上，隨后在過氧酸下氧化生成磷酰基，完成反應(yīng)。

目前，多肽的磷酸化修飾方法主要有兩種：

（1）將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中；

（2）多肽序列在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進行磷酸化。
 

1）將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中：

即事先將需要磷酸化的氨基酸（Thr,Ser或Tyr）磷酸化并適當保護，然后按照正常SPPS 合成流程將磷酸化單體縮合到多肽指定位點。這種方法操作簡便，已經(jīng)成為多肽單位點 磷酸化修飾的主要方法。



 

2）多肽序列在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進行磷酸化：

        采用將磷酸化單體縮合到多肽中的方法進行磷酸化修飾時，磷酸化的氨基酸由于側(cè)鏈修 飾的較大基團產(chǎn)生的位阻而導(dǎo)致難以與肽鏈縮合，并且之后的氨基酸引入都會比較困難， 尤其在含有多個磷酸化位點修飾時，合成將變得異常困難，并且最終產(chǎn)物成分復(fù)雜，難 以分離，產(chǎn)率極低。
        因此，當肽鏈中多個位點進行磷酸化時，可以考慮采用將多肽序列 在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進行磷酸化：其合成過程主要 就是在多肽合成結(jié)束之后，選擇性的脫去要標記氨基酸的側(cè)鏈保護基，對于Tyr，Thr可 以直接使用側(cè)鏈不保護的氨基酸進行反應(yīng)。

        側(cè)鏈保護基在1%TFA/DCM條件下可以定量的脫 除。采用這種方法時，可以采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體， 連接到羥基上，然后在過氧酸條件下氧化生成磷?；?，完成反應(yīng)。

磷酸肽的的介紹

在所有的PTM中，磷酸化是最豐富和最重要的修飾之一。磷酸基團是一個高度帶負電的分子，在磷原子周圍有一個四面體結(jié)構(gòu)。磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr 殘基的側(cè)鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。許多激素均是通過提高絲氨酸（Ser）或蘇氨酸（Thr）殘基的磷酸化狀態(tài)來調(diào)節(jié)特異性酶的活性。磷酸化與人類疾病高度相關(guān)。例如，tau、α-synuclein和huntingtin的過度/多重磷酸化與人類疾病高度相關(guān)，聚集磷酸化也爆發(fā)神經(jīng)退行性疾病的主要原因之一，例如阿爾茨海默氏病、帕金森氏病和亨廷頓氏病。目前，對磷酸化氨基酸的主要研究集中在羥基磷酸單酯型磷酸化氨基酸（O-磷酸化氨基酸），即磷酸化絲氨酸，磷酸化蘇氨酸，磷酸化酪氨酸。

專肽生物生物為客戶提供pSer、pTyr、pThr和D-pSer、D-pTyr、D-pThr的磷酸化修飾服務(wù)，也可以進行二、三、四、五個磷酸化位點修飾的高質(zhì)量多肽的合成。