修飾概述

1. N端或側(cè)鏈氨基的修飾

   乙?；?(Acetylation)

   甲?；?(Formylation)

   生物素標記 (Biotin)

   脂肪酸修飾 (Palm, Myr,Lauryl)

   三氟乙?；?(TFA)

   苯甲?；?(Bzo)

   2-氨基苯甲?；?(Abz)

   Maleimide

   氯乙?；?、溴乙?；?/span>

   Suc修飾

   Hynic

   DOTA、NOTA (Chelating Peptides)

2. C端修飾

   酰胺化 (Amidation)

   酯化 (Esterification)

   AMC

   AFC 

   pNA

   CMK

   FMK

   醛基化(-CHO)

   醇基化(-ol)

   AOMK

3. 多肽磷酸化標記

   p-Tyr

   p-Ser

   p-Thr

4. D型氨基酸

   常見氨基酸：D-Ala、D-Cys、D-Asp、D-Glu、D-Phe、D-His、D-Ile、D-Lys、D-Leu、D-Met、D-Asn、D-Pro、D-Gln、D-Arg、D-Ser、D-Thr、D-Trp、D-Tyr

   非常見氨基酸：D-Nle、D-Nal、D-Nva、D-Orn、D-Tic、D-Pen、D-Abu、D-Bal、D-Cha、D-Cit、D-Hyp、

5. 甲基化及其它烷基化修飾

   N-甲基化修飾：

   NMe-His、NMe-Met、NMe-Gly、NMe-Ala、NMe-Asn、NMe-Asp、NMe-Arg、NMe-Cys、NMe-Glu、NMe-Gln、NMe-Leu、NMe-Ile、NMe-Lys、NMe-Ser、NMe-Thr、NMe-Trp、NMe-Val、NMe-Nle、NMe-Phe

   其他位點甲基化修飾：Lys(Me)、Lys(Me)2、Lys(Me)3、Arg(Me)、Arg(Me)2S、Arg(Me)2AS、Cys(Me)、Asp(OMe)、Glu(OMe)、Tyr(Me)、Trp(Me)

   同一條序列的多個氨基酸N-烷基化（Peptoid)

   其它的烷基化修飾服務：N-乙基、N-苯丙基、N-烯丙基、Tyr(Et)、Trp(For)、Ser側(cè)鏈烷基化

6. 同位素標記|多種氨基酸 (D型以及L型)的13C，15N，D以及18O的同位素標記
7. 單熒光修飾

   N端、Lys或Cys巰基：

   FAM、FITC、TAMRA、Bodipy、Cy3、Cy5、Cy5。5、Cy7

   N端或Lys側(cè)鏈：

   DansylChlorde、Mca、Dabcyl、Dnp、CarboxyRhodamine110、7OHCCA、Tide Fluor 系列、Alexa Fluor 系列、Texas Red、QSY系列、Atto 系列

   Cys巰基：DACIA、Farnesyl

   Glu、Asp側(cè)鏈或者C端：Edans

8. 雙熒光修飾 (FRET peptide)

   Dabcyl+Edans

   Mca+Dnp

   FITC+5FAM

   5FAM+TQ2

   Cy5+QSY21

   6FAM+QSY9

   5TAMRA+QSY7

   DNP+DACIA

   5FAM+Farnesyl

   Tide Fluor 555+Tide Fluor 647

   Tide Fluor 488+Tide Flour550

9. 其它側(cè)鏈修飾

   Tyr衍生物：Tyr(3-Cl)、Tyr(3-NO2)、Tyr(SO3H2)

   Phe衍生物：Phe(4-Cl)、Phe(4-NO2)、Phe(3-Cl）、Phe(4-CF3)

   Ser側(cè)鏈烷基化：Ser(Butanoyl)、Ser(Octanoyl)、Ser(Palm)、Ser(Laury)、Ser(Myr)

10. PEG (聚乙二醇)修飾

    PEG2、PEG4、PEG8、PEG12、PEG24、PEG36

    PEG2000、PEG5000、PEG3400

    PEG20K、PEG40K

11. 多肽蛋白偶聯(lián)

    KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)

    BSA (Bovine Serum Albumin)

    OVA (Ovalbumin)

12. 環(huán)肽合成

    訂書肽(stapled and stiched peptide)

    首尾成環(huán)

    側(cè)鏈成環(huán)（內(nèi)酯、內(nèi)酰胺、醚鍵等）

    多重二硫鍵及二硒鍵(Sec&Sec)

    click chemistry（通過肽分子內(nèi)疊氮-炔基的Husigen反應合成環(huán)肽）

    單硫醚環(huán)化

    Cyclization via xylene or mesitylene

13. 糖肽

    alpha-, beta-Glc and beta-N-acetylgalactosamine (GalNAc)

    Glucose: Ser(beta-D-GlcNAc), Thr(beta-D-GlcNAc, Asn(beta-D-GlcNAc), etc.

    Galactose: Ser(alpha-D-GalNAc) and Thr(alpha-D-GalNAc) (Tn Antigens)

    Ser(Gal-beta(1-3)GalNAc) and Thr (Gal-beta(1-3)GalNAc) (TF Antigens)

    Mannose: Ser(alpha-D-ManNAc), Thr(alpha-D-ManNAc, Ser(alpha-D-Man), Thr(alpha-D-Man)

C端或側(cè)鏈羧基修飾

杭州專肽生物可將各種含有氨基或羥基的小分子化合物或藥物分子，通過化學手段，與多肽的C端羧基，形成酰胺鍵或酯鍵，以合成種類繁多的多肽衍生物。以下展示部分常見的C端修飾種類。

C端修飾種類	修飾簡寫	修飾結(jié)構
酰胺化 (Amidation)	-NH2
甲氨基化 (Methylation)	-NHMe
乙胺基化 (Ethamidation)	-NHEt
己氨基化 (Hexamidation)	-NH(CH2)6
醇基化 (Alcoholylation)	-OL
甲酯化 (Methylation)	-OMe
乙酯化 (Ethylation)	-OEt
芐酯化 (Benzyl esterification)	-OBzl
醛基化 （Aldolization）	-CHO
對硝基苯胺 (P-nitroaniline)	-pNA
7-氨基-4-三氟甲基香豆素 (7-amino-4-trifluoromethylcoumarin)	-AFC
7-氨基-4-甲基香豆素 (7-amino-4-methylcoumarin)	-AMC
氯甲基酮 (Chloromethyl ketone)	-CMK
氟甲基酮 (Fluoromethyl ketone)	-FMC
2,6-二甲苯甲酰氧甲基酮 (2,6-xylyloxymethyl ketone)	-AOMK
多巴胺 (Dopamine)	-DOPA
苯胺 (Phenylamine)	-NHPh

成功案例（C端修飾或側(cè)鏈羧基修飾）

1， 產(chǎn)品序列：H-Arg-His-Asp-Asn-Phe-Gln-Ala-Val-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp-Leu-NHCH2CH3

2， 產(chǎn)品結(jié)構：

3，產(chǎn)品HPLC圖譜

4，產(chǎn)品MS圖譜

N端或側(cè)鏈氨基修飾

修飾名稱	修飾簡寫	修飾結(jié)構
生物素化 （Biotinylation）	Biotin-
生物素-6氨基己酸 （Biotin-Acp-）	Biotin-Acp-
2-疊氮乙酸 (2-azidoacetic Acid)	N3-Gly-
5-疊氮戊酸 (5-Azivalic Acid)	N3-Ava-
6-疊氮己酸 (6-azidohexanoic Acid)	N3-Acp-
3-馬來酰亞氨基丙酸 (3-Maleimidopropionic Acid)	MIPA-
6-馬來酰亞胺基己酸 (6-Maleimidocaproic Acid)	Mal-
丁酸 (Butyric Acid)	But-
丁二酸/琥珀酸 (Succinic Acid)	Suc-
異丁酸 (Isobutyric Acid)	Iba
N-炔丙基甘氨酸 (N-Propargylglycine)	N-Propargylglycine-
硫辛酸 (Lipoic Acid)	lipoic acid-

成功案例（側(cè)鏈氨基修飾）

1、產(chǎn)品序列：H2N-WHSDMEWWYLLGK(AEEA-MIPA)-OH，MIPA: 3-馬來酰亞氨基丙酸，AEEA: NH2-PEG2-乙酸
產(chǎn)品結(jié)構：

2、HPLC圖：

3、MS圖：

熒光分子標記

多肽熒光標記由于沒有放射性，實驗操作簡單。因此，目前在生物學研究中多肽熒光標記應用非常廣泛，多肽熒光標記方法與熒光試劑的結(jié)構有關系，對于有游離羧基的采用的方法與接多肽反應相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。 在N端標記FITC的多肽需經(jīng)歷環(huán)化作用來形成熒光素，通常會伴有最后一個氨基酸的去除，但當有一個間隔器如氨基己酸，或者是通過非酸性環(huán)境將目的多肽從樹脂上切下來時，這種情況可避免在切割的過程中被TFA切割掉。

（紅色加粗的熒光基團，為常用基團)

成功案例（單熒光分子標記）

1、產(chǎn)品序列：BHQ-1-Arg-Lys-Cys-Pro-Leu-Met-Trp-Ser-Gly-Gly-OH

2、產(chǎn)品結(jié)構：

3、產(chǎn)品HPLC報告：

4、產(chǎn)品紫外檢測報告：

雙熒光標記

修飾簡寫	修飾結(jié)構
Abz和pNA
DABCYL和EDANS
Dansyl和EDANS
Suc和AMC

成功案例（雙標記）

1，產(chǎn)品序列：（Abz）-VAGL-pNA

2，產(chǎn)品結(jié)構：

3，產(chǎn)品HPLC報告：

4，產(chǎn)品MS報告：

多肽磷酸化標記

1、磷酸化應用：磷酸肽在生命過程中發(fā)揮重要作用，磷酸化的位置在多肽上的Tyr、Ser，Thr，。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸，目前使用的都是單芐基磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法，但是目前采用該方法合成磷酸化多肽也有缺點，特別是在合成多磷酸化多肽或氨基酸較長的多肽的時候，連接效率低，最后產(chǎn)品純度很低，對于這種磷酸化多肽，我們考慮采用后磷酸化方法，其合成過程就是在多肽合成結(jié)束后，選擇性脫去要標記的氨基酸的側(cè)鏈保護基，對于Tyr，Thr可以直接使用側(cè)鏈不保護的氨基酸進行反應，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt），在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化，采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體，連接到羥基上，隨后在過氧酸下氧化生成磷?；?，完成反應。

2、磷酸化修飾分類

2.1. L型磷酸化修飾  

        Thr(H2PO3)、 pT 、蘇氨酸磷酸化
        Tyr(H2PO3)、pY 、酪氨酸磷酸化
        Ser(H2PO3) 、pS、絲氨酸磷酸化

2.2. D型磷酸化修飾

        D-Thr(H2PO3)、p(D-T)  、D型蘇氨酸磷酸化
        D-Tyr(H2PO3)、p(D-Y) 、D型酪氨酸磷酸化
        D-Ser(H2PO3) 、p(D-S)、D型絲氨酸磷酸化   

2.3.  雙磷酸化修飾

          一個序列中有兩個Thr，Tyr，Ser 位點進行磷酸化修飾。

2.4.   多磷酸化修飾

          一個序列中有多個Thr，Tyr，Ser 位點進行磷酸化修飾

3、磷酸化位點結(jié)構

修飾名稱	修飾簡寫	修飾結(jié)構
磷酸化絲氨酸	pSer、Ser(H2PO3)
磷酸化酪氨酸	pTyr、Tyr(H2PO3)
磷酸化蘇氨酸	pThr、Thr(H2PO3)

4 、磷酸化的作用

蛋白質(zhì)磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾，20世紀50年代以來一直被生物學家看作是一種動態(tài)的生物調(diào)節(jié)過程。在細胞中，大概有1/3的的蛋白質(zhì)被認為是通過磷酸化修飾的。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾與多種生物學過程密切相關，如DNA損傷修復、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳導、細胞凋亡的調(diào)節(jié)等。磷酸化蛋白質(zhì)及多肽的研究可以幫助人們闡述上述過程的機理，進一步認識生命活動的本質(zhì)。近年來隨著蛋白質(zhì)組技術的不斷發(fā)展，蛋白質(zhì)磷酸化的研究越來越受到廣泛的關注。

蛋白質(zhì)磷酸化在細胞信號轉(zhuǎn)導中的作用

磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr殘基的側(cè)鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白質(zhì)磷酸化過程的必不可少的工具，因此研究蛋白質(zhì)及多肽的磷酸化反應并確定成熟簡便的合成路線就變得非常重要。目前為止，多肽的磷酸化修飾主要有后磷酸化法和單體法兩種合成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹脂上合成完后，再對其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進行磷酸化；單體法則是將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中，這種方法較后磷酸化法操作更為簡便，已經(jīng)成為多肽磷酸化修飾的主要方法。單體法修飾時，磷酸化的氨基酸由于側(cè)鏈修飾的較大基團產(chǎn)生的位阻而導致難以與肽鏈縮合，并且之后的氨基酸引入都會比較困難，尤其在含有多個磷酸化位點修飾時，合成將變得異常困難，并且最終產(chǎn)物成分復雜，難以分離，產(chǎn)率極低。因此，當肽鏈中多個位點進行磷酸化時，可以考慮采用后磷酸化法，其合成過程主要就是在多肽合成結(jié)束之后，選擇性的脫去要標記氨基酸的側(cè)鏈保護基，對于Tyr，Thr可以直接使用側(cè)鏈不保護的氨基酸進行反應。側(cè)鏈保護基在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化時，可以采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體，連接到羥基上，然后在過氧酸條件下氧化生成磷?；瓿煞磻?。

成功案例（磷酸化多肽）

1、多肽序列：TDHGAEIVYK (pSer)PVVSGDT(pSer)P RHL –CONH2

2、多肽結(jié)構：

3、HPLC圖譜：

D型氨基酸

與自然界中普遍存在的20種L型氨基酸相比，19種D型氨基酸(Gly沒有手性)往往在多肽活性和穩(wěn)定性中有著特殊作用，因此常被做為最基本的序列改造工具。

D型氨基酸可用于酶的結(jié)構-功能分析方面的研究；用于合成多肽藥物，如多肽抗生素（阿撲西林ASPOXICILLIN），腸胃藥（OXTREOTIDE），利尿藥，腹瀉藥（善得定SANDOSTATIN ACETATE），酶抑制劑，促皮質(zhì)素類似物，止痛鎮(zhèn)痛藥，減肥藥，Ⅱ型糖尿病治療藥（那格列奈NATEGLINIDE）等。

在專肽生物的多肽合成服務中，我們專門列了這樣一個19種D型氨基酸欄目，方便大家去選擇。

{D-Ala} D-丙氨酸
{D-Arg} D-精氨酸
{D-Asp} D-天冬氨酸
{D-Asn} D-谷氨酰胺
{D-Cys} D-半胱氨酸
{D-Glu} D-谷氨酸
{D-Gln} D-谷氨酰胺
{D-His} D-組氨酸
{D-Allo-Ile} D-別異亮氨酸
{D-Leu} D-亮氨酸
{D-Lys} D-賴氨酸
{D-Met} D-甲硫氨酸
{D-Pro} D-脯氨酸
{D-Phe} D-苯丙氨酸
{D-Ser} D-絲氨酸
{D-Tyr} D-酪氨酸
{D-Thr} D-蘇氨酸
{D-Trp} D-色氨酸
{D-Val} D-纈氨酸

注：Gly甘氨酸沒有手性， Ile對應的為D-別異亮氨酸。

成功案例（D型氨基酸）

1、產(chǎn)品序列：全D型nghqtpalqqgthssrqvtplslrsrsstfnk

2、產(chǎn)品結(jié)構：

3、產(chǎn)品HPLC報告：

4、產(chǎn)品MS報告：

甲基化描述

甲基化修飾多肽也叫甲基化標記多肽，甲基化修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）的一種，幾乎參與細胞所有的生命活動過程，發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，蛋白質(zhì)在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下將甲基轉(zhuǎn)移至特定的氨基酸殘基上共價結(jié)合的過程。甲基化是一種可逆的修飾過程，由去甲基化酶催化去甲基化作用。研究發(fā)現(xiàn)，常見甲基化／去甲基化作用的氨基酸主要是賴氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）研究表明，組蛋白賴氨酸甲基化修飾執(zhí)行著多種生物學功能，如干細胞的維持和分化、Ｘ染色體失活、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和ＤＮＡ損傷反應等，主要是影響染色質(zhì)濃縮，抑制基因表達。組蛋白精氨酸甲基化在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮著重要作用，并能影響細胞的多種生理過程，包括DNA修復、信號轉(zhuǎn)導、細胞發(fā)育及癌癥發(fā)生等因此專肽生物特地開發(fā)甲基化修飾多肽技術，為科學家在蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMS）的研究中提供幫助。

根據(jù)多肽上甲基化氨基酸多肽修飾或標記的位置可以分為：

1. N端甲基化修飾（20種L型氨基酸氨基上增加一個甲基）

2. 側(cè)鏈甲基化修飾 （Arg精氨酸甲基化多肽、Lys賴氨酸甲基化多肽）

根據(jù)甲基化修飾多肽的個數(shù)可以分為：

1. Arg(me)精氨酸單甲基修飾多肽

2. Arg(Me)2(Asymetrial)精氨酸非對稱二甲基修飾多肽

3. Arg(Me)2(Symetrical)精氨酸對稱二甲基修飾多肽

4. Lys(Me)賴氨酸單甲基修飾多肽

5. Lys(Me)2賴氨酸二甲基修飾多肽

6. Lys(Me)3賴氨酸三甲基修飾多肽

烷基化描述

修飾名稱	修飾簡寫	修飾結(jié)構
己酸	Hex-
辛酸	Oct-
癸酸	Dec-
十一烷酸	Undecyl-
十二烷酸，月桂酸	Lau-
十四烷酸，肉豆蔻酸	Myr-
十六烷酸，棕櫚酸	Pal-
十八烷酸， 硬脂酸	Ste-

同位素標記描述

專肽生物提供同位素標記服務，如果您想讓多肽分子量增加特定的道爾頓，我們可以根據(jù)多肽序列，為您選擇合適的同位素氨基酸。

我們將同位素氨基酸大致分為以下幾類。

1，D全標記

2，13C,14N全標

3，僅13C全標記

4，α-13C單標記

5，15N單標記，僅標記一

應用：1，隨著對生長抑素(somatostatin，SST)及其類似物研究的日趨深入，利用放射性核素標記的ssT類似物與腫瘤細胞表面的生長抑素受體(somatostatin receptor，ssTR)特異性結(jié)合使腫瘤顯像，從而達到定位、定性診斷的目的，已成為當今核醫(yī)學領域研究的主要內(nèi)容之一。

螯合物前體多肽

放射性金屬元素，例如： Cu、 Ga、 Lu、等可以通過與富含氨基或羧基配體的螯合作用引入多肽分子，在正電子發(fā)射計算機斷層顯像（PET）技術中發(fā)揮重要的作用，被廣泛地應用于腫瘤的診斷研究。

專肽生物可對所生產(chǎn)的多肽標記與放射性金屬螯合的配體，滿足客戶相應的研究需求（注：專肽生物不提供螯合放射性金屬元素的服務）。以下是一些常見的、客戶所選擇的螯合配體：

配體簡寫	配體名稱	結(jié)構
DOTA	1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸
NOTA	1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷-N,N',N''-三乙酸
DTPA	二乙烯三胺五醋酸

PEG修飾簡介

聚乙二醇（PEG），也稱為聚環(huán)氧乙烷（PEO），是可溶于水和大多數(shù)有機溶劑的兩親性聚醚。PEG及其衍生物是可用于由美國FDA認證的生物藥物產(chǎn)品的少數(shù)聚合物之一。

PEG修飾是指將PEG聚合物鏈共價連接到靶分子，通常是小分子化學藥物或大生物分子如肽，蛋白質(zhì)，碳水化合物，脂質(zhì)，寡核苷酸，親和配體，輔因子，脂質(zhì)體和其他生物材料。而作為藥物先導化合物的多肽分子在體內(nèi)的應用受到一定程度的限制，主要體現(xiàn)在生物體腎小球的過濾作用、體內(nèi)蛋白酶的水解破壞作用以及因多肽分子引起的體內(nèi)抗原反應。將多肽用PEG修飾后（Pegylation），上述三方面的限制均大幅減小，從而提高了多肽在生物體內(nèi)的應用。

專肽生物可對所合成的多肽進行各種不同類型的PEG修飾，以滿足客戶的不同需求。主要修飾位點在多肽的N端、C端，Lys側(cè)鏈和Cys的巰基。修飾所用PEG單分子分子量區(qū)間在PEG2~PEG24之間；PEG大分子分子量區(qū)間在PEG500~PEG40K之間。

PEG分類	修飾簡寫	細節(jié)說明	修飾位置	PEG結(jié)構
小分子PEG	PEG2、mini-PEG、AEEA	右側(cè)可選乙酸或羧基兩種形式	肽鏈N端、C端、Lys側(cè)鏈、肽中間等
	PEG3、mini-PEG3、AEEEA	右側(cè)可選乙酸或羧基兩種形式	肽鏈N端、C端、Lys側(cè)鏈、肽中間等
	PEG4	右側(cè)可選乙酸或羧基兩種形式	肽鏈N端、C端、Lys側(cè)鏈、肽中間等
	PEG6	右側(cè)可選乙酸或羧基兩種形式	肽鏈N端、C端、Lys側(cè)鏈、肽中間等
高分子PEG	mPEG-NH2	500、550、750、1000、2000、5000等	肽鏈C端，或Asp側(cè)鏈
	NH2-PEG-NH2	1000 、2000 、3400 、5000、10000、20000、40000等	肽鏈C端，或Asp側(cè)鏈
	NH2-PEG-COOH	1000 、2000 、3400 、5000、10000、20000、40000等	肽鏈C端，或Asp側(cè)鏈
	NH2-PEG-Galactose	2000、3400、5000等	肽鏈C端，或Asp側(cè)鏈
	mPEG-COOH	500、550、750、1000、2000、5000等	N端修飾
	HO-PEG-COOH	2000、5000等	N端修飾
	COOH-PEG-COOH	550、750、1000、2000等	N端修飾

Click方法（添加疊氮、烯基、炔基、DBCO、TCO等基團到多肽中）的介紹

點擊化學（Click chemistry），又稱為“鏈接化學”或“動態(tài)組合化學，其主旨是通過小單元的拼接，來快速可靠地完成各種分子的化學合成。點擊化學的代表反應為銅催化的疊氮-炔基Husigen環(huán)加成反應。點擊化學在多肽化學中的應用主要體現(xiàn)為一條肽鏈中的炔基和另一條肽鏈中的疊氮基通脫1,3-偶極環(huán)加成反應形成三氮唑五元環(huán)結(jié)構。此結(jié)構能穩(wěn)固多肽與蛋白質(zhì)的空間結(jié)構，快速偶聯(lián)兩條肽鏈，同時使肽鏈的二級結(jié)構（α-螺旋和β-折疊）發(fā)生改變來改變其生物活性。點擊化學的反應條件比較接近人體的生理環(huán)境，反應時間短，可以防止蛋白質(zhì)的變性。

點擊化學反應可分為三類：

（1） Cu（I）催化疊氮化物-炔烴點擊化學反應（CuAAC）；

（2） 菌株促進疊氮化物-炔烴點擊化學反應（SPAAC）。它具有生物相容性。

（3） 四嗪和烯烴（反式環(huán)辛烯）之間的配位作用。這種高速反應也是不含銅的，這是體內(nèi)細胞標記的理想選擇。

Click Chemistry由于其溫和的條件和高的選擇性，已被廣泛用于制藥和生物技術行業(yè)的生物共軛，生物標記和材料科學。 Click化學工具具有廣泛的功能基團：疊氮化物，炔烴，DBCO，TCO，四嗪，BCN ...

專肽生物提供將多種Click結(jié)構添加到多肽結(jié)構中，以滿足廣大科研人員的實驗要求。

分類	說明	修飾結(jié)構	原料名稱	簡寫	修飾位置
引入疊氮	疊氮化物試劑使Click Chemistry成為可能，并可用于與含胺的生物分子反應，修飾羧酸基團等。		2-疊氮乙酸	N3-Gly-	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
			5-疊氮戊酸	N3-Ava-	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
			6-疊氮己酸	N3-Acp-	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
			Lys(N3)	-Lys(N3)-、-K(N3)-	類似于氨基酸，任意位置，如N端，C端，肽段中間
引入烯基	烯基化物試劑使Click Chemistry成為可能，并可用于與含胺的生物分子反應，修飾羧酸基團等。		2-甲基丙烯酸	Methacryl-	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
			4-戊烯酸	pentenoic acid-	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
			5-己烯酸	5-heptenoic acid-	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
引入炔基	炔烴試劑可通過銅催化的疊氮化物-炔烴Click化學與含疊氮化物的化合物或生物分子反應，以產(chǎn)生穩(wěn)定的三唑鍵。		N-炔丙基甘氨酸	N-Propargylglycine-	肽鏈N端、C端、Lys側(cè)鏈、肽的中間等
			4-戊炔酸	Pentinoyl-	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
			5-己炔酸	5-Hexynoic acid-	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
Bicyclo[6.1.0]nonyne BCN試劑	BCN試劑（雙環(huán)[6.1.0] nonyne）可以通過無銅的Click Chemistry與疊氮化物標記的分子或生物分子反應。		BCN試劑	BCN	\
Dibenzocyclooctyne 二苯并環(huán)辛炔	DBCO（二苯并環(huán)辛炔）試劑是用于應變促進的炔疊氮化物環(huán)加成（SPAAC）的最具反應性的環(huán)炔烴之一，可實現(xiàn)無銅點擊化學。		二苯并環(huán)辛炔	DBCO	肽鏈N端、C端、Lys側(cè)鏈、肽的中間等
Trans-Cyclooctene Reagents 反式環(huán)辛烯試劑	TCO試劑（反式環(huán)辛烯試劑）可用于通過無銅Click Chemical標記抗體，蛋白質(zhì)和其他大分子。		反式環(huán)辛烯試劑	TCO	肽鏈N端、Lys側(cè)鏈
Tetrazine reagents Tetrazine試劑	Tetrazine試劑可用于許多應用，例如抗體標記和蛋白質(zhì)修飾。發(fā)現(xiàn)川嗪以反式-環(huán)辛烯（TCO）作為親二烯體進行生物正交反應的動力學最快。與甲基四嗪相比，四嗪的化學穩(wěn)定性較低。		Tetrazine試劑	Tetrazine	\

成功案例（引入疊氮、烯、炔、Click運用）

1、產(chǎn)品序列：Propargyl-PEG6-KKK-NH2

2、產(chǎn)品結(jié)構：

3、產(chǎn)品HPLC圖譜

4、產(chǎn)品MS圖譜

生物素標記

生物素-親合素系統(tǒng) (biotin-avidin system，BAS)，是70年代后期應用于免疫學，并得到迅速發(fā)展的一種新型生物反應放大系統(tǒng)。由于它具有生物素與親合素之間高度親和力及多級放大效應，并與熒光素、酶、同位素等免疫標記技術有機地結(jié)合，使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進一步提高。主要有用于標記多肽氨基的生物素N-羥基丁二酰亞胺酯(BNHS)和生物素對硝基酚酯(pBNP)，其中以BNHS最常用，當然，也可以直接使用生物素也可以標記，因為其結(jié)構上有個游離的羧基，采用HBTU/HOBt/DIEA方法縮合，由于生物素的溶解度低，使用DMSO/DMF的混合溶劑增加溶解度。

此外生物素是復合維生素B2的組成部分。它與雞清蛋白、親和素、真菌蛋白、鏈霉親和素均有較高親和性和結(jié)合力。親和素和 鏈霉親和素都是四聚體蛋白，可緊緊地結(jié)合四分子D-biotin，其結(jié)合力是已知自然界中最強的非共價作用。生物素與親和素之間的相互作用可用于蛋白純化、檢測、固化、藥物導向和蛋白質(zhì)結(jié)構分析等方面。多肽生物素標記常在肽的N端或Lys側(cè)鏈；肽鏈 C端也可用Biotin標記，此時肽鏈C端需引入Lys或者乙二胺結(jié)構。

生物素標記位置	結(jié)構展示
多肽N端
Lys側(cè)鏈
多肽C端

成功案例（生物素標記）

1、產(chǎn)品序列：H-Gly-LysAla-Gly-Gly-Lys-Ala-Lys-Asp-Ser-Gly-Lys-Ala-Thr-Lys(Biotin)-OH

2、產(chǎn)品結(jié)構：

3、HPLC圖譜

4、MS圖譜

環(huán)肽（酰胺、二硫、硫酯、硫醚、酯鍵、脲基、硫脲）

專肽生物提供各種環(huán)狀多肽的定制合成服務。

成環(huán)修飾分類	成環(huán)修飾名稱	成環(huán)修飾結(jié)構展示
酰胺成環(huán)	首尾酰胺鍵成環(huán)
	C端與中間Lys或Orn酰胺成環(huán)
	N端與中間Asp或Glu酰胺成環(huán)
	中間酰胺成環(huán)
二硫鍵成環(huán)	分子內(nèi)一對二硫鍵
	分子內(nèi)兩對二硫鍵
	分子內(nèi)三對二硫鍵
	分子間一對二硫鍵
	分子間兩對二硫鍵
酯鍵成環(huán)	普通酯鍵成環(huán)
	硫酯鍵成環(huán)
醚鍵成環(huán)	普通醚鍵成環(huán)
	硫醚鍵成環(huán)
脲基成環(huán)	普通脲基成環(huán)
	硫脲成環(huán)
CLIPS環(huán)	1-CLIPS
	2-CLIPS
	3-CLIPS

成功案例（多肽成環(huán)修飾）

1、產(chǎn)品結(jié)構：

2、HPLC圖

3、MS圖

引入各種特殊氨基酸

為滿足科研人員對多肽的各種要求，杭州專肽生物可以將一些特殊氨基酸插入到多肽序列中，前面已有各種D型、甲基化氨基酸和同位素標記氨基酸，此處展示其它特殊氨基酸。

特殊氨基酸的名稱	氨基酸簡寫	結(jié)構展示
硒代半胱氨酸	Sec
側(cè)鏈乙酰化賴氨酸	Lyc(Ac)
鳥氨酸	Orn
2,4-二氨基丁酸	Dab
2,3-二氨基丙酸	Dap
正亮氨酸	Nle
4-氨基丁酸	GABA
α-氨基辛二酸	Asu
苯甘氨酸	Phg
炔丙基甘氨酸 Propargylglycine	Pra
D-炔丙基甘氨酸	D-Pra
羥脯氨酸 L-Hydroxyproline	Hyp
D-羥脯氨酸 D-Hydroxyproline	D-Hyp
胍氨酸 Citrullin	Cit
D型胍氨酸 D-Citrullin	D-Cit

MAPs多聚抗原肽

多聚抗原肽(Multiple-Antigen peptide, MAP)是生產(chǎn)高效價的抗多肽抗體和多肽疫苗的一種有效方法。

杭州專肽生物根據(jù)客戶需求，幫助客戶設計并且按要求定制合成各種MAP類產(chǎn)品，所合成的產(chǎn)物純度和收率均較高。

多聚抗原肽分類	分類簡寫	結(jié)構展示
二分支	MAPs-2
四分支	MAPs-4
八分支	MAPs-8
部分多聚抗原肽的結(jié)構設計問題 1，聚合度的設計，n=2-8都可以合成，n越大，合成難度也會越大。 2，支鏈部分的肽序列，可以不一樣，常見于2分支肽的兩個支鏈肽段。 3，序列中可以插入賴氨酸，通過賴氨酸側(cè)鏈引入熒光基團（常見的5-Fam、Fitc），以達到實驗檢測目的。   4，對于4分支肽或者8分支肽，空間位阻因素對合成的影響就體現(xiàn)出來了，通?？梢栽谥ф滊亩魏唾嚢彼岬陌被g插入 6氨基己酸，增加肽段之間的空間距離。

成功案例（分支肽）

1、產(chǎn)品序列：{(GSVHIHIIHG)2-Lys}2-Lys-Lys(5-Fam)-OH 2四分支肽

2、產(chǎn)品結(jié)構：

3、產(chǎn)品HPLC圖譜

4、產(chǎn)品MS圖譜

KLH、BSA、OVA載體蛋白偶聯(lián)服務

多肽載體蛋白偶聯(lián)修飾用于制備抗多肽類抗體。單獨的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反應，而帶有很多抗原表位的載體蛋白有利于刺激輔助性T細胞，進一步誘導B細胞免疫反應。將多肽用載體蛋白修飾后，其作為一個整體來激起免疫反應，所產(chǎn)生的抗體中有針對多肽的，有針對鏈接劑的，也有針對載體蛋白的。

最常見的載體蛋白有3種:

1）KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)即血藍蛋白，它是在某些軟體動物、節(jié)肢動物(蜘蛛和甲殼蟲)的血淋巴中發(fā)現(xiàn)的一種游離的藍色呼吸色素。血藍蛋白含兩個直接連接多肽鏈的銅離子，與含鐵的血紅蛋白類似，它易于氧結(jié)合，也易與氧解離，是已知的惟一可與氧可逆結(jié)合的銅蛋白，氧化時呈青綠色，還原時呈白色。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是最常被選用的載體蛋白。

2）BSA (Bovine Serum Albumin)，即牛血清白蛋白，它屬于最穩(wěn)定的和可溶的白蛋白。它大約有30-35個主要氨基可用于與鏈接劑發(fā)生共軛反應, 使得BSA成為一種很流行的弱抗原化合物載體蛋白。BSA的不利之處在于在很多實驗中，它被當作封閉劑使用，如果多肽-BSA偶聯(lián)物的抗血清用于這樣的檢測分析中，通常會出現(xiàn)假陽性，因為這些血清含有抗BSA的抗體。

3）OVA (Ovalbumin)，即雞卵白蛋白。它可作為第二載體蛋白去驗證抗體是否特異性地只針對多肽而并非載體蛋白(如BSA)。

R8S5訂書肽介紹

一般來說，多肽大分子發(fā)揮其生物活性和藥理作用是通過其二級和三級結(jié)構來實現(xiàn)的。簡單的線性結(jié)構多肽由于其構象比較以穩(wěn)定，在發(fā)揮生物活性作用方面受到比較大的限制。針對上述問題，多肽化學家設計了Stapled Peptides，其原理是通過碳碳雙鍵，將多肽中某一特定片段序列構象穩(wěn)定下來，以滿足特定的研究需求。Stapled Peptides一般采用S5和R8，中間間隔3個氨基酸，通過烯烴復分解反應來形成碳碳雙鍵。專肽生物還可以開發(fā)其它類似的側(cè)鏈含烯烴結(jié)構的特殊氨基酸，來形成其它類似的衍生物。

訂書肽的合成與普通多肽合成的區(qū)別在于在固相合成肽鏈過程中引入兩個含有α-甲基，α-烯基的非天然氨基酸，然后兩個非天然氨基酸之間發(fā)生烯烴復分解反應環(huán)化構成穩(wěn)定α-螺旋結(jié)構構象的全碳支架，進而合成訂書肽。